产品货号：
SN0063
中文名称：
碱性磷酸酶
英文名称：
Alkaline Phosphatase
产品规格：
1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
注意事项：
使用方法：
相关搜索：碱性磷酸酶，载体线性化，质粒去磷酸化，核苷酸去磷酸化，蛋白质去磷酸基团，Alkaline Phosphatase
本碱性磷酸酶在碱性环境下可催化DNA、RNA以及核苷酸5'端和3'端磷酸基团的水解，也能够去除蛋白磷酸基团，但不能催化磷酸二脂及磷酸三脂的水解。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| Alkaline Phosphatase(1U/μL) | 1mL |
| 10×AP Buffer | 2×1.0mL |
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
- 核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
- 核酸外切酶残留检测：将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
- 宿主检测：将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的Taq Man qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
注意事项：
- 与Alkaline Phosphatase结合的DNA在琼脂糖凝胶中可能会出现条带偏移或弥散，为避免此现象，可在样品中加入混有SDS的6×Loading Buffer，先在80℃温育20min，冰浴降温后再进行电泳。
- 本制品在GenCut Buffer中具有100%活性，且失活条件为80℃温育20min，因此可与GenCut内切酶在同管进行“酶切-去磷酸化”反应，大大简化了实验流程。
使用方法：
- 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应
- 在冰上配制如下反应体系：
成分 用量 质粒DNA 1μg 10×GenCut Buffer 2μL GenCut限制性内切酶 1μL Alkaline Phosphatase 1μL ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育15～30min。如果延长温育时间，可能产生星号活性。
- 80℃温育20min，以终止反应。为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。
- 在冰上配制如下反应体系：
- 核苷酸去磷酸化
该方案适用于去除DNA的3'和5'端磷酸基团。- 在冰上配制如下反应体系：
成分 用量 线性DNA 1μg 10×AP Buffer 2μL Alkaline Phosphatase 1μL ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育10min。
- 80℃温育20min，以终止反应。
- 在冰上配制如下反应体系：
- 蛋白质去磷酸基团
- 在冰上配制如下反应体系：
成分 用量 磷酸化蛋白质 2～4μg（终浓度0.1～0.2mg/mL） 10×AP Buffer 2μL Alkaline Phosphatase 10μL ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育1h。
- 添加EDTA至50mM的终浓度，或者添加钒酸钠（Na3VO4）10mM的终浓度，以终止反应。
- 在冰上配制如下反应体系：
实验时请根据具体底物类型适当调整Alkaline Phosphatase的使用量以及最佳温育时间。
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